MANUAL DE PRÁCTICA
MODULO
I: IDENTIFICA MICROORGANISMOS CON BASES EN TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS PARA
DIAGNÓSTICO CLÍNICO.
SUMÓDULO
II: IDENTIFICA MICROORGANISMOS EN BASE A TÉCNICAS BACTERIOLÓGICAS.
|
Técnicos en Laboratoristas Clínicos
COORDINADOR: MARTHA CELINA MORENO FACUNDO
AUTORES
NAYELI JASMIN AVENDAÑO MARTINEZ
YERANY MARLYTH PEREZ DIAZ
ARACELI MONTSERRAT GARCIA HERNANDEZ
CARLOS ERNESTO VAZQUEZ GUTIERREZ
ISAIAS DE JESUS AVENDAÑO VAZQUEZ
EXUDADO FARÍNGEO
El sistema respiratorio está dividido en dos vías
altas (superiores) y vías bajas (inferiores).
Dentro de las vías: altas se encuentra la nariz,
faringe, boca.
Dentro de las vías bajas: se encuentra los
bronquios, pulmones, tráquea, laringe
Es la toma de muestra que se
realiza en el fondo de la garganta (en
las amígdalas, generalmente), mediante el uso el uso de un hisopo estéril. Esta
sirve como herramienta de diagnóstico de padecimientos de origen bacteriano.
La obtención muestra se
realiza introduciendo el hispo y se dan vueltas
sobre la muñeca a fin de que todo quede empernado. Se le da continuidad sembrando
en medios de cultivos.
La toma de muestra se debe
realizar a la primera hora y procesarla, pero lo recomendable es ir en ayunas,
no ingerir alimentos o no tener higiene bocal, es recomendable que se coloque
en un transporte del medio de Stuart si el medio no se trabajara al instante
por lo que se puede contaminar y las bacterias no resistirán y morirán.
(Tomando como los más nutritivos) (También se puede usar)
-
Agar Sangre - Agar McConkey
-
Agar chocolate
- Caldo MRVP
-
Sal y manitol -
Solución salina
-
Caldo nutritivo
- Huller Hintón
Incubar a 37°C y observar resultados en 48 horas
Dentro de los propósitos para
realizar un exudado faríngeo, están:
o
Diagnosticar:
angina estreptocócica (streptococcus
beta-hemolítico del grupo A), difteria, angina de Vincent, infección por Haemophilus.
o
Establecer
focos de infección en enfermedades como: fiebre reumática,
escarlatina, glomerulonefritis hemorrágica aguda (streptococcus
B-hemolítico del grupo A), endocarditis (streptococcus viridans), tosferina (bortella.
o
Detectar portadores de: staphylococcus
aureus, streptococcus B-hemolítico del grupo A, neisseria meningitidis,
corynebacterium diphteriae.
o
Investigar presencia de neumococo en garganta (streptococcus pneumoniae), debido a que
se ha encontrado en muchas personas que no presentan ninguna sintomatología (30
por 100de portadores sanos). Por lo que es importante considerarla.
El tracto respiratorio
habitual (la faringe) está formado por distintos microorganismos entre los que
destacan los siguientes grupos y especies: estreptococos,
estafilococos, micrococos, neisserias, Moraxella catarrhalis,
corinebacterias, Haemophilus spp, Porphyromonas,
Prevotella, Fusobacterium, Veillonela, Peptostreptococcus, Actinomyces,etc.
Sin embargo, cuando encontramos una patología en la faringe, el agente
etiológico más frecuentemente aislado es el Streptococcus pyogenes,
pero también, otros microorganismos patógenos que podemos hallar son: Streptococcus
pneumoniae, Streptococcus alfa-hemolítico grupo viridans,etc.
PRINCIPALES CAUSAS DE INFECCIONES DEL TRACTO
RESPIRATORIO SUPERIOR
Diagnóstico
clínico
|
Virus
|
Bacterias
y hongos
|
Rinitis
|
Virus Coxsacckie A,
virus parainfluenza e influenza, virus sincitial respiratorio, rinovirus,
adenovirus, coronovirus
|
Raros
|
Faringitis o
amigdalitis
|
Virus Coxasackie A 6
B, virus parainfluenza e influenza, Herpes simples, adenovirus, rinovinis,
Epstein-Barr
|
Stretococcus
pyogenes Estretococos beta hemolíticos grupo B,C,G. Neisseria gonorrhoeae
Arcanobacterium haemolyticum.
|
Sinusitis
|
Raros
|
Stretococcus
pneumoniae, Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, Streticoccus
pyogenes, anaeróbicas
|
Ninguno
|
Corynebacterium diphtherlae, Fudobacterium nucleatum
y Borrella vincenti
|
|
Epiglottitis
|
Ninguno
|
Haemophillus influenza serotipo b
|
Estomatitis
|
Virus Coxsackie A, Herpes simple
|
Especies de candida,
fusobacterium sp. Espiroqueta
|
Abscesos
perimigdalino o retrofaringeo
|
Ninguno
|
Streptococcus
pyogenes, anawrobios buscales como Fusobacterium sp. Staphylococcus aureus
|
Tosferina o
coqueluche
|
Ninguno
|
Bondetella
pertusis
|
EN QUÉ CONSISTE EL FROTIS FARÍNGEO
Su realización es sencilla, indolora y lleva poco tiempo. Se le solicita
al paciente que incline la cabeza hacia atrás con la boca abierta, mientras el técnico
de laboratorio o médico frota con un hisopo o aplicador de algodón estéril a lo
largo de la parte posterior de la garganta, cerca de las amígdalas. Si el
profesional no puede ver con claridad la parte posterior de la garganta,
presionará la lengua con un abatelenguas para ver mejor.
Es posible que el médico deba raspar la parte posterior de la garganta
varias veces sobre las zonas inflamadas o enrojecidas, lo cual mejora las
probabilidades de detectar bacterias.
Cuando la muestra llega al laboratorio, los microorganismos se colocan
en una caja de vidrio donde se encuentra un medio de cultivo que permite su
reproducción. El tipo de bacteria se determina con ayuda del microscopio,
además de observar la forma en que se desarrolla y el medio en que crece.
PARA QUÉ SIRVE EL CULTIVO DE EXUDADO FARÍNGEO
Este examen se realiza para determinar las causas de alguna infección de nariz y garganta que
no responde adecuadamente al tratamiento. Con frecuencia, este tipo de
afecciones se deben a un virus, pero el cultivo permite determinar cuándo se
debe a una bacteria (principalmente estreptococo).
Cabe señalar que un cultivo de este
tipo también puede hacerse con prueba de antibiograma, la cual le ayuda al
médico a determinar qué antibióticos funcionarán mejor en el tratamiento
PREPARACIÓN DEL PACIENTE
Sólo es necesario
que el paciente no se lave la boca, ni utilice enjuague bucal antes del examen,
ni que consuma alimentos, ni consumir
medicamentos durante 8 días, colocar la muestra en el medio de Stuart
RIESGOS
El cultivo de exudado faríngeo no representa
ningún riesgo, aunque es importante señalar que el paciente debe contener la
sensación de náusea y molestias al momento del examen. Si el impulso de vomitar
o toser no es fácil de soportar, es probable que se deba aplicar anestesia
tópica para evitar este acto reflejo.
En el caso de niños pequeños, es importante que los padres hablen con
ellos y les expliquen que este examen no representa ningún riesgo. Asimismo,
deben ayudar a que el chico se relaje y permanezca quieto para que el
profesional pueda frotar adecuadamente la garganta y amígdalas.
DIRERENTES TIPOS DE HEMOLISIS
Hemolisis
Alfa: Es la formación de una zona parcial de destrucción de los
eritrocitos alrededor de la colonia de un cultivo de agar sangre a menudo a
acompañada de una coloración del medio de verdosa a parduzca. Hemolisis
incompleta
Principales
Microorganismos
Streptococcus
pneumoniae (neumococos) Es la principal causa de neumonía
adquirida en la comunidad, así como otitis median y meningitis. Son diplococos
Gram (+).
Streptococcus
viridans Es uno de los microorganismos saprofitos más
frecuentes en garganta y prácticamente nunca se da valor a su aislamiento. (stretococcus mutans) como
causa importante de caries dental.
Hemolisis Beta: Es la formación de una zona clara por la total destrucción
de los eritrocitos alrededor de colonias
de los estreptococos. Hemolisis completa.
Principales Microorganismos
Grupo
A: Streptococcus pyogenes Es
el agente etiológico de la escarlatina erisipela, fiebre reumática, amigdalitis
o faringitis estreptocócica etc.
Grupo
B: S.agalactie causa de neumonía y meningitis en
neonatos y en las personas más jóvenes, con bacteriemia sistematica ocasional.
Hemolisis
Gamma: Es la actividad hemolítica no aparente o sin ninguna
descoloración del medio alrededor de la colonia, es decir no produce ninguna
hemolisis. Ausencia de hemolisis
Generalmente son saprofitos.
Entre ellos destacan los pertenecientes al grupo D de Lancefield, que a veces
son capaces de producir alfa o beta hemolisis y que en algún ocasión se han
descritos como patógenos faríngeos.
TINCIÓN GRAM
La tinción Gram sirve para
describir los hallazgos de células inflamatorias y de alteración de la flora
normal habitual, como es el caso del aumento de bacilos Gram negativo
fusiformes y es reportar la presencia de células levadururiformes, hifas
y pseudóhifas.
Clasificación de los gérmenes según coloración de Gram
|
||
Gram positivos
|
Gram negativos
|
|
Staphylococcus
aureus
Streptococcus
B hemolítico (A,B,C,D)
Strptococcus
Grupo viridans
Streptococuus bovis
Enteroccoccus
Streptococcus pneumoniae
Bscillud anthracis
Coryneacterium diphteriae
Listeria monocytogenes
|
Neisseria meningitides
Neisseria gonorrhoeae
Acinetobacter
Bordetella pertussis
Brucella
Campylobacter fetus
Escherichia coli
Haemophilus
influenzae
Klebsiella pneumoniae
|
Legionella
pneumophila
Proteus
mirabils
Pseudomonas
aeruginosa
Salmonella
typhi
Serratia
marcescens
Shigella
Bacteroides
fragilis
Yersinia
pestis
|
PRINCIPALES PRUEBAS BIOQUÍMICAS
- Coagulasa
(staphulococcus aureus)
- Catalasa
( Estafilococo de estreptococo)
- Oxidasa
(Neisserias y Pseudomonas)
Flora habitual y patógenos respiratorio
|
||
Microorganismos habitual
|
posibles patógenos respiratorios
|
Patógenos definitivos
|
Estreptococos
del grupo viridans
Estafilococos
coagulasa negativo
Micrococos
Corynebacterium sp.
Neisseria sp.(no patogeno)
Lactobacillus sp.
Veillonella
sp.
Esperoquetas
|
Estreptococos
beta- hemolítica
Haemophilus
influenzae
Haemophilus
parainfluenzae
Streptococcus
pneumoniae
Neiserias
patógenas
Morexalla
catarrhalis
Fusobacterium sp.
Bacteroides sp.
Actinomices sp.
|
Corynebacterium diphtheriae
Bordetella pertussis
Mycoplasma pneumonia
|
ANTIBIOGRAMA
El
antibiograma es útil para la instauración de un tratamiento antibiótico
correcto al paciente. Es necesario conocer si el microorganismo responsable de
la infección posee mecanismos que le confieran inmunidad frente a algún
antibiótico para no incluirlos como terapia.
Los
Macrolidos y Lincosanidos son dos grupos de antibióticos de estructura química
diferentes pero muchas similitudes en su acción. Si antibióticos
bacteriostáticos (bactericidas a dosis altas) que se unen a la fracción
ribosómica 50s impediendo la síntesis de proteínas bacterianas. Son activos
frente a Gram positivos, anque hay algunos Gram negativo sensible.
Exudado vaginal
El exudado vaginal es remitido al laboratorio para el
diagnóstico de vaginitis, una inflamación de la vagina, y vaginosis, una
alteración del equilibrio de la flora vaginal sin inflamación. La infección
vaginal es frecuentemente la causa de molestias en la mujer adulta y los
síntomas de vaginitis son los síntomas de índole ginecológico que con más
frecuencia ven ginecólogos y médicos de atención primaria. La vaginosis
bacteriana es la causa más frecuente de consulta de la mujer por síntomas
vaginales (40 - 50 %), seguida por candidiasis (20 - 25 %), y trichomoniasis
(15 - 20 %). La causa de vaginitis/vaginosis no puede determinarse sólo sobre
la base de los síntomas clínicos o el examen físico. Para realizar el
diagnóstico correcto se requiere la evaluación microscópica del exudado
vaginal. Los métodos de cultivo son menos útiles para el diagnóstico de algunas
entidades vaginales. La evaluación microscópica requiere evaluar tres
características: - aspecto de las células epiteliales - aspecto del germen
dominante y/o morfotipos presente - la presencia o ausencia de leucocitos.
TOMA DE
MUESTRA PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA INFECCIÓN VAGINAL.
La muestra debe
tomarse usando un espéculo vaginal y obtener el exudado vaginal con un
escobillón. En estudios comparando la sensibilidad de diferentes
localizaciones, la toma del exudado vaginal del fornix posterior es más
sensible y exacta para realizar el diagnóstico.
ANTES DE LA PRUEBA
Antes de realizar la prueba, es aconsejable seguir
una serie de consejos para no correr el riesgo de invalidar el resultado
del exudado vaginal. Consejos como evitar las relaciones
de pareja en las últimas 24 horas y evitar utilizar cremas o productos de
higiene el día de la visita al médico.
FROTIS VAGINAL EMBARAZO
Se realiza para evitar una
posible infección de gérmenes y los riesgos que podría implicar tanto para
el futuro bebé como para la madre. Conviene realizar la prueba
al inicio del embarazo, y en caso de dar positiva aplicar el tratamiento
adecuado. Un segundo examen se llevará a cabo entre la semana 35 y 37 de
gestación. La prueba ayuda a detectar la presencia de estreptococos
beta-hemolíticos.
VAGINOSIS BACTERIANA
Alteración en el equilibrio bacteriano en la vagina con
perdida del predominio de lactobacilo e incremento en el número de bacterias
como Gardnerella vaginalis, Bacteroides, Mobiluncus, y Mycoplasma hominis.
Importante es que no hay células inflamatorias. Diagnóstico Clásicamente se
establece el diagnóstico de vaginosis cuando se cumple 3 de los siguientes
criterios (Amsel): – pH 4,5 o superior pH 4,5 o superior. – más del 20 % de las
células epiteliales son células “clue”. – Descarga grisácea homogénea. – Test
de aminas positivos. El cultivo vaginal no es útil para el diagnóstico, el
valor predictivo de un cultivo positivo para Gardnerella vaginalis como
diagnóstico de vaginosis es menor del 50 %. Así el diagnóstico lo haremos con
el Gram y consideramos existencia de vaginosis si no aparecen leucocitos y
cualquiera de estos criterios: - aparecen células "clue" - presencia
de abundantes bacilos Gram variables, pequeños o gram negativos curvados y
ausencia o escasos Lactobacillus. - presencia de abundantes bacilos Gram
variables, pequeños o gram negativos curvados y ausencia o escasos
Lactobacillus. - cumple los criterios de Nugent y Thomason; más de 7 morfotipos
bacterianos distintos
Candida albicans es responsable para el 80 % al 92 % de los
casos. C. albicans forma parte de la flora de la vagina en 15-20 % de mujeres
sanas y 30- 40 % de mujeres embarazadas. La distinción entre candidiasis
vulvovaginal y colonización asintomática es difícil porque los signos y
síntomas indicativos de candidiasis se solapan con otros patología vaginales.
En muchos laboratorios se usa la tinción de Gram y parece que proporciona el
método más exacto de identificación de la enfermedad, de manera similar a la
candidiasis muco-oral. Del 10 - 55% de mujeres sanas asintomática se logra el
aislamiento de Candida del exudado vaginal, dando lugar a diagnósticos que se
pueden etiquetar como falsos positivos.
TRICHOMONIASIS
El diagnóstico se basa en un pH mayor de 4,5 de las secreciones
vaginales y en la presencia del parásito en movimiento al microscopio (esto en
el 60 % de las mujeres sintomáticas, muy baja sensibilidad). Cuando el parásito
pierde la movilidad es difícil distinguir a Trichomonas de las células blancas.
Por ello es necesario examinar el exudado lo más rápidamente posible tras la
obtención de la muestra. El cultivo es el método más exacto para detectar
Trichomonas. 86 al 95 % de los casos se detectan por este método. Basados en el
cultivo, 25 - 50 % de las mujeres con infección por Trichomonas vaginalis en un
trabajo son asintomáticas. Medio de cultivo Diamond o Roiron.
OTRAS INFECCIONES MENOS FRECUENTES
Infecciones verdaderas causadas por Mycobacterium
tuberculosis, Salmonella sp. y Enterobacteriaceae son muy raras y aparecen en
pacientes con enfermedad subyacente o enfermedad sistémica. - Vaginitis por
Streptococcus pyogenes, relativamente frecuente en niñas de 3 – 5 años. -
Streptococcus agalactiae. Usualmente presente en vagina como flora normal pero
ocasionalmente causa una vaginitis franca. - Enterobius vermicularis. En niña
es causa de síntomas vaginales asociado con prurito perianal que aumenta por
las noches.
